Comparison of Capillary Zone Electrophoresis with High-pressure Liquid Chromatography in the Evaluation of HemoglobinopathiesÖzlem Çakır Madenci, Özlem Hürmeydan, Asuman Orçun, Fatma ErdoğmuşUniversity of Health Sciences Türkiye, Kartal Dr. Lütfi Kırdar City Hospital, Biochemistry Laboratory, İstanbul, Türkiye
Objective: The capillary zone electrophoresis (CZE) and highperformance liquid chromatography (HPLC) methods were compared in terms of HbA2 measurement for the assessment of hemoglobinopathies.
Materials and Methods: CZE was compared with HPLC for the evaluation of patients without hemoglobinopathy (n=321), with β-thalassemia trait (n=113), and with common (HbD-Punjab, E, C, S/A, and S/S) and rare (HbS/D, O-Arap, Lepore, G-Coushata, Setif, Hamadan, Q-Iran, and H) variants (n=21). The reference range for HbA2 was determined by CZE.
Results: Among patients without hemoglobinopathy, the median (2.5th-97.5th percentiles) values were 97.4% (97.0-98.0%) and 97.5% (96.6-98.4%) for HbA (p=0.060) and 2.4% (1.6-3.0%) and 2.5% (1.6-3.1%) for HbA2 (p<0.001) by HPLC and CZE, respectively. The reference range for HbA2 was 1.6-3.1% by CZE. In the comparison of methods for HbA2, there was a constant error of 0.255 (confidence interval: 0.062-0.448) and bias of 0.10% (limit of agreement: 0.33- 0.53), and higher values were obtained with CZE. A strong correlation was observed between the methods (r=0.782). Interrater agreement was almost perfect for clinical diagnosis (κ=0.911). The two methods detected and identified the common variants similarly. All rare variants, except HbH by HPLC and HbS/D by CZE, were detected as separate peaks by both methods.
Conclusion: The two methods were in agreement regarding the preliminary identification of β-thalassemia patients. Different Hb variants were detected by both methods but with possible methodological interference for HbA2 measurements. CZE is a reliable and simple alternative for the evaluation of hemoglobinopathies. The standardization of HbA2 measurements should be prioritized as more techniques become available in routine laboratory practice.
Keywords: Other hemoglobinopathies, Thalassemia, Hemoglobin disorders, Anemia
Hemoglobinopatilerin Değerlendirilmesinde Kapiller Zone Elektroforezinin Yüksek Basınçlı Sıvı Kromatografisi ile KarşılaştırılmasıÖzlem Çakır Madenci, Özlem Hürmeydan, Asuman Orçun, Fatma ErdoğmuşUniversity of Health Sciences Türkiye, Kartal Dr. Lütfi Kırdar City Hospital, Biochemistry Laboratory, İstanbul, Türkiye
Amaç: Hemoglobinopatilerin değerlendirilmesinde HbA2 ölçümü açısından kapiller zone elektroforezi (CZE) ve yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC) yöntemleri karşılaştırıldı.
Gereç ve Yöntem: Hemoglobinopatisi olmayan (n=321), β-talasemi taşıyıcısı (n=113) ve yaygın (Hb D-Punjab, E, C, S/A, S/S) ve nadir (Hb S/D, O-Arap, Lepore, G-Coushata, Setif, Hamadan, Q-Iran ve H) varyantları (n=21) olan hastalarda CZE ile HPLC karşılaştırıldı. HbA2 için referans aralığı CZE tarafından belirlendi.
Bulgular: Hemoglobinopatisi olmayan hastalarda HPLC ve CZE ile medyan (2,5-97,5 persentil) değerleri HbA için sırasıyla %97,4 (97,0-98,0) ve %97,5 (96,6-98,4) (p=0,060), HbA2 için %2,4 (1,6-3,0) ve %2,5 (1,6-3,1) bulundu (p<0,001). HbA2 için referans aralığı CZE ile %1,6-3,1 idi. HbA2 için yöntem karşılaştırma çalışmasında sabit hata 0,255 (CI; 0,062-0,448) ve Bias %0,10 (LOA; 0,33-0,53) bulundu ve CZE ile daha yüksek sonuçlar elde edildi. Yöntemler arasında güçlü bir korelasyon elde edildi (r=0,782). Klinik tanı açısından iki yöntem mükemmel uyum gösterdi (κ=0.911). Her iki yöntem de ortak varyantları tespit etti ve benzer şekilde tanımladı. HPLC ile HbH ve CZE ile HbS/D dışındaki tüm nadir varyantlar, her iki yöntemle de ayrı pikler olarak saptandı.
Sonuç: β-talasemi hastalarının ön tanımlamasında her iki yöntem de uyum içindeydi. Her iki yöntemle farklı Hb varyantları saptandı, ancak HbA2 ölçümlerinde olası bir metodolojik etkileşim söz konusuydu. CZE, hemoglobinopatilerin değerlendirilmesi için güvenilir ve basit bir alternatiftir. Rutin laboratuvar pratiğinde fazla sayıda teknik mevcut olduğundan, HbA2 ölçümünün standardizasyonuna öncelik verilmelidir.
Anahtar Kelimeler: Diğer hemoglobinopatiler, Talasemi, Hemoglobin bozukluğu, Anemi
Özlem Çakır Madenci, Özlem Hürmeydan, Asuman Orçun, Fatma Erdoğmuş. Comparison of Capillary Zone Electrophoresis with High-pressure Liquid Chromatography in the Evaluation of Hemoglobinopathies. Turk J Hematol. 2023; 40(4): 258-265
Corresponding Author: Özlem Çakır Madenci, Türkiye |
|